蛋白酶熒光檢測試劑盒 V1
貨號: 001.41 試劑盒：100 T 運輸：4℃， 儲存:–20℃
產(chǎn)品描述：蛋白酶熒光檢測試劑盒是即用型，簡單便捷。主要檢測蛋白酶活性的存在, 原理是利用異硫氰酸熒光素 (FITC) 標記的酪蛋白作為底物，熒光被淬滅，蛋白降解后，釋放熒光。本試劑盒可檢測多種蛋白酶。適用于檢測絲氨酸、半胱氨酸、金屬和天冬氨酸蛋白酶等。蛋白酶降解導致FITC標記的酪蛋白底物裂解成更小的片段，在酸性條件下這些片段處于溶解狀態(tài)。測量FITC標記片段的熒光，激發(fā)波長:485 nm，發(fā)射波長:535 nm，間接反映酶的存在。靈敏度：所述試劑盒程序檢測濃度為 50ng每個反應
試劑盒組成：
A：蛋白酶反應緩沖液2X：5ml
B：三氯乙酸 (TCA) 溶液10X：5mL 6.1 N
C：異硫氰酸熒光素 (FITC)：100ul
D：陽性對照：胰蛋白酶，20 mg
步驟：
1. 對于每個測試樣品，將 40 uL 孵育緩沖液與10-40uL 測試樣品加入微量離心管中。對于具有高蛋白酶活性的測試樣品，可能需要進行樣品稀釋。
2. 陽性對照樣品：向微量離心管中加入 40 µL 孵育緩沖液、和 10 µL 胰蛋白酶對照樣本，制備適當?shù)膶φ諛颖荆▍⒁妼φ諛颖荆?
3. 空白對照：向微量離心管中加入 40uL孵育緩沖液，10-40uL超純水，制備空白樣品。
4. 輕輕混合，因為過度的湍流可能會導致高熒光背景并降低檢測的靈敏度。 觀察熒光變化。最長孵育至 24 小時，可提高靈敏度。注意不要超過 24 小時，因為 FITC-酪蛋白可能開始降解，導致高熒光增高。
5. 孵育后，向每個微量離心管中加入40μL的1X TCA 溶液。
6. 輕輕混合并在 37°C 避光孵育 30 -60分鐘。
7熒光測量：熒光定量PCR儀，熒光檢測儀，熒光酶標儀均可。在 485 nm 處激發(fā)的熒光強度并監(jiān)測 535 nm 的發(fā)射波長。
8.檢測限：產(chǎn)生顯著熒光讀數(shù)高于空白樣品所得值的蛋白酶量，通常是50ng。
9.讀數(shù)等于用空白樣品獲得的值的 1.2倍 被認為陽性。
10.將胰蛋白酶對照溶液配制成20mg/ml，即1ug/uL。再得到10ng/ul 的對照溶液，加入5uL。
11.異硫氰酸熒光素作為可能的儀器校準或確定 FITC 信號的線性范圍的對照。
注意事項：僅供研發(fā)使用, 不用于藥物、診斷或其他用途。
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