Cat: CE001   Store：-20℃     Size：100T   Price：310    

 

產(chǎn)品介紹：

堿性磷酸酶(ALP)在堿性環(huán)境中催化磷酸酯的水解,會導(dǎo)致自由基和無機磷酸鹽的形成。在哺乳動物中，ALP酶主要存在于肝臟、骨骼和腎臟中。血清ALP水平顯著升高，稱為高堿性磷酸酶血癥，該變化與惡性膽道梗阻、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、肝淋巴瘤和結(jié)節(jié)病相關(guān)。

本試劑盒適用于科學(xué)研究和藥物開發(fā)。堿性磷酸酶檢測試劑盒可直接測定血液、尿液等其他生物樣品中的ALP活性，無需預(yù)處理。利用ALP水解對硝基苯基磷酸，生成淡黃色產(chǎn)品，在波長405 nm有最大吸光度。分光光度變化的反應(yīng)速率與酶活性成正比。該測定方法檢出最低為2U/L, 線性范圍可達800 U/L，當樣品ALP活性超過800 U/L時，用PBS稀釋樣品，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。對于ALP活性低的樣品，培養(yǎng)時間可延長至4 min以上。參考值ALP活性(U/L)人血清為12.4土2，大鼠血清為190+2.0,羊血清為202.8+4.5.

 

產(chǎn)品適用：

本試劑盒適用于血清、血漿、唾液、骨髓等堿性磷酸酶活性的檢測。

 

試劑盒組分：250T

（1）檢測緩沖液(pH 10.5)       50 mL

（2）醋酸鎂 (0.2 M)           1.5 mL

（3）pNPP 底物 (1 M)          600μl

（4）校準劑檸檬黃             10 mL

所需的設(shè)備：移液槍，熒光儀或酶標儀、透明平底96孔板、1.5 mL離心管、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、Triton-100，可以在96孔板中進行檢測，

 

樣品前期處理：

（1）ALP在4℃可穩(wěn)定48小時，在20℃可穩(wěn)定2個月。

（2）EDTA,草酸鹽，氟化物和檸檬酸鹽是已知的ALP抑制劑，在樣品制備中應(yīng)避免使用。

（3）血清、血漿(不含EDTA/檸檬酸鹽，理想情況下為未溶血)和細胞培養(yǎng)基可直接測定。

（4）細胞裂解物：10⁵細胞PBS洗滌，溶解在0.5 mL 0.2% Triton X-100，孵育20分鐘。

（5）將5~50μl樣品轉(zhuǎn)移到透明平底96孔板的適當孔中。

 

工作試劑的制備：

（1）試劑：分析緩：200 uL + 醋酸鎂 (0.2 M) ：5μL + pNPP液體(1 M) 2μL；

（2）將200 μ純凈水(空白組)和200 μ Calibrator分別轉(zhuǎn)入96孔板的不同組中；

（3）移管150 ~ 195 uL工作試劑到樣品孔。樣品孔的最終反應(yīng)容積應(yīng)為200 uL；

（4）輕輕拍打盤子攪拌。

（5）立即在405nm處利用酶標儀讀取光密度，4分鐘后在酶標機上再次讀取。

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